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              OCI-AML4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              發(fā)布時(shí)間:2017-03-23瀏覽:1239次

              OCI-AML4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

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              產(chǎn)品名稱:OCI-AML4細(xì)胞

              中文名稱:人急性髓系白血病細(xì)胞

              種屬:人

              來源:急性髓系白血病;女性

              培養(yǎng)條件:IMDM

              生長狀態(tài):懸浮

              OCI-AML4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

              其他細(xì)胞培養(yǎng)用液

              在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,除了培養(yǎng)基外,還經(jīng)常用到一些平衡鹽溶液、消化液、pH調(diào)整液等。

              一、平衡鹽溶液(balanced  salt  solution,BSS):主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。主要用于取材時(shí)組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。zui簡單的BSSRingerD-Hank'sHank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO2  的培養(yǎng)條件,Hank's平衡液僅含有0.35g/L  NaHCO3,不能用于5%CO2的環(huán)境,若放入CO2培養(yǎng)相,溶液將迅速變酸,使用時(shí)應(yīng)注意。

              配制溶液應(yīng)使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫滅菌。

               

              OCI-AML4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

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              DCS    人樹突狀細(xì)胞        樹突狀細(xì)胞    DMEM    貼壁消化液:取材進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)常常需要將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液,傳代培養(yǎng)時(shí)也需要將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來,常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和EDTA溶液,有時(shí)也用膠原酶(collagenase)溶液。

              1、胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,常見有11251250,即一份胰酶可消化125250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度,配制時(shí)要用不含Ca2+    、Mg2+及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank's),因?yàn)檫@些物質(zhì)會(huì)對(duì)胰酶產(chǎn)生抑制作用。胰酶作用及溶解的*pH8-9,配制胰酶溶液應(yīng)將液體調(diào)至pH8左右,充分溶解,過濾除菌。過濾后可以再調(diào)只pH7.5,也可不調(diào)。

              使用細(xì)胞清洗液配制胰酶消化液:含0.5%胰酶的細(xì)胞清洗液(100ml細(xì)胞清洗液加0.5g胰酶),過濾除菌,分裝于4度保存。

              2EDTA溶液:EDTA溶液也常用來解離細(xì)胞,它的作用機(jī)制是破壞細(xì)胞間的連接。對(duì)于一些貼壁特別牢固的細(xì)胞,還可以用EDTA和胰酶的混合液進(jìn)行消化。EDTA溶液的使用濃度為0.02%,配制時(shí)應(yīng)加堿助溶,配制后可過濾除菌,也可高溫消毒滅菌。

              3、膠原酶溶液:膠原酶在上皮類細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)經(jīng)常使用,膠原酶作用的對(duì)象是膠原組織,因此不容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L200000U/L,作用的*pH6.5。膠原酶不受Ca2+ 、Mg2+及血清的抑制,配制時(shí)可用PBS。

              OCI-AML4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

               

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