細(xì)胞名稱(chēng)

Raw264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

貨號(hào)

M003

種屬

小鼠

細(xì)胞來(lái)源

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

生長(zhǎng)特性

貼壁 單核細(xì)胞樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：90% DMEM  +10% FBS（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清 貨號(hào)：HN-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣，5%二氧化碳

傳代

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代；

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積70%，已有部分細(xì)胞開(kāi)始堆疊時(shí)，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3至1：6；

3傳代步驟：去掉舊培養(yǎng)基后，使用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，再加入培養(yǎng)基重懸傳代。或去掉舊培養(yǎng)基后，加入冷PBS或培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行吹打?qū)⑵鋸钠康追蛛x。吹打次數(shù)不宜過(guò)多，以免造成細(xì)胞損傷。若懸浮細(xì)胞較多，可直接用舊培養(yǎng)基吹打細(xì)胞，吹打完成后吸出培養(yǎng)基，1000r/min離心5min，去上清后加入新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

保存

凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。)

保存條件：液氮存儲(chǔ)

供應(yīng)限制

僅供研究之用

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過(guò) 72 小時(shí)）

3.細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。