在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。

    使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。

    試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。

    所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的elisa試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

    ELISA試劑盒競爭法
    在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。

    競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。

    a. 陽性判定值法

    與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml.每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先計(jì)算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例如0.300），試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個(gè)陰性對照重新計(jì)算×NCX；如有2個(gè)陰性對照A超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算：

    陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX

    標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A＞陽性判定值的反應(yīng)為陰性。

    b. 抑制率法

    抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，按下式計(jì)算：

    抑制率（%）= （陰性對照A值-標(biāo)本A值）×100%/陰性對照A值

    一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。