豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒使用說明書

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【樣品制備】  取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

【洗滌液配制】  使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解（在37℃水中加熱5~10分鐘），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：每板用20 ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7天。

【樣品和對(duì)照稀釋】  樣品稀釋： 1:40的體積稀釋待檢血清樣品（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清樣品）。 對(duì)照稀釋：在血清稀釋板中按1:40分別稀釋陽性對(duì)照和陰性對(duì)照（234μl樣品稀釋液中加6μl對(duì)照血清）。

【注意事項(xiàng)】 

1  試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后放回2~8℃。

2  不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3  不要用口移液。 

4  底物液B不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。

5  未使用的抗原包被板切記不要撕開上面的封口膜。

6  待檢血清樣品數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測(cè)血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到檢測(cè)板，使反應(yīng)時(shí)間一致。

7  濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

8  嚴(yán)格按照操作說明書可以獲得的結(jié)果。

【操作步驟】 

1  取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），分別將稀釋好的待檢血清和對(duì)照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100μl。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。

2  甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl，靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計(jì)洗滌5次，

3  每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃溫育30分鐘。

4  洗滌5次, 方法同2。切記每次在干凈吸水紙上拍干。

5  每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l）,混勻,室溫(18℃~25℃)避光顯色10分鐘。 

6  每孔加終止液一滴(50μl)，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果（測(cè)定前在震蕩器上輕輕震動(dòng)一下）。

【結(jié)果判定】 在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630nm值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔平均OD630nm值≥0.6，陰性對(duì)照孔平均OD630nm值必須＜0.3。   樣品OD630nm值＞0.35，判為陽性；樣品OD630nm值＜0.35，判為陰性。 注意：用620~650納米波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果均有效。

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