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              MHCC-97H MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

              發(fā)布時間:2016-04-01瀏覽:2004次

              標(biāo)題名稱:MHCC-97H  MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

              細(xì)胞名稱

               MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

              種屬

              組織來源

              生長狀態(tài)

              貼壁生長

              細(xì)胞形態(tài)

              上皮樣

              培養(yǎng)條件

              培養(yǎng)基類型:DMEM(Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

              FBS(德國SERANAS-FBS-SA-015): 10%

              抗生素:雙抗

              培養(yǎng)條件:37℃,CO2: 5%

              傳代方法

              收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài):

              如果沒長滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

              如果細(xì)胞已經(jīng)長滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

              貼壁細(xì)胞傳代方法:

              1 棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

              2 加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),隨時觀察細(xì)胞狀態(tài)變化,待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

              懸浮細(xì)胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

              1 直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

              2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi), 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

               一般沒有特殊說明,細(xì)胞一般是一傳二。

              凍存方法

              70% *培養(yǎng)基,20%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

              儲存:液氮中長期保存。

              1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計細(xì)胞密度。

              2 在運(yùn)輸過程中可能會導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

              3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等,請拍照并在三天內(nèi)與我們。

              注意:我公司所用德國SERANAS-FBS-SA-015南美血清,細(xì)胞長勢很好,凡購買我公司MHCC-97H,我公司贈送20-50ML試用裝一瓶。

              當(dāng)您收到正確產(chǎn)品時,需要計數(shù)細(xì)胞以確定其數(shù)量和活性。

              這一步驟非常重要,能確定您收到的產(chǎn)品是否合格

              1. 在生物安全柜(超凈工作臺)中,將細(xì)胞混勻。細(xì)胞在1.5ml和2ml試管中的,請選用1000μl的槍頭混勻;在5ml,15ml或50ml的試管中的,請選用5ml的移液管混勻。

              2. 從試管中取10μl細(xì)胞樣品,和10μl胎盤蘭混勻后;加入細(xì)胞計數(shù)板中,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

              選取正確的稀釋倍數(shù),對正確計算細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞活性是非常重要的

              試管規(guī)格

              細(xì)胞量

              細(xì)胞取樣

              0.4%臺盤蘭

              PBS(1×)

              稀釋倍數(shù)

              1.5ml

              0.5-1×106

              10μl

              10μl

              -

              2

              2ml

              0.5-1×106

              10μl

              10μl

              -

              2

              5ml

              5×106

              10μl

              10μl

              -

              2

              15ml

              10×106

              10μl

              10μl

              -

              2

              15ml

              15-20×106

              10μl

              10μl

              80μl

              10

              50ml

              30-100×106

              10μl

              10μl

              80μl

              10

              N = 細(xì)胞計數(shù)板上四個大格的細(xì)胞量

              D = 稀釋倍數(shù)

              細(xì)胞數(shù)量和活性計算公式:

              細(xì)胞數(shù)量 = N/4×D×_ml = _ × 104

              細(xì)胞活性 = 沒有染上臺盼蘭的細(xì)胞/全部的細(xì)胞×100%

              如果你計數(shù)的細(xì)胞明顯少于我們聲稱的細(xì)胞數(shù),請按以下步驟操作:

              (1) 檢查細(xì)胞懸液中是不是有細(xì)胞團(tuán)。

              如果有的話,請用1000μl的槍頭輕輕吹打混勻后,再次取樣計數(shù)。

              (2) *的細(xì)胞濃度是在計數(shù)板中的每個大格里有50-100個細(xì)胞(總數(shù)200-400)。

              如果不是,請做適當(dāng)?shù)臐舛认♂尯?,再計?shù)一次。

              (3) 請立即與我們。

              MCF-10A MCF-10A細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

              MHCC-97L MHCC-97L細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

              MHCC-97H  MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

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