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              MHCC-97L MHCC-97L細胞 細胞株培養(yǎng)

              發(fā)布時間:2016-04-01瀏覽:2663次

              標(biāo)題名稱:MHCC-97L MHCC-97L細胞 細胞株培養(yǎng)

              細胞名稱:MHCC-97L 人低轉(zhuǎn)移肝癌細胞

              種屬:人

              組織來源:肝

              生長狀態(tài):貼壁生長

              細胞形態(tài):上皮樣

              培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基類型:DMEM(Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

              德國SERANAS-FBS-SA-015: 10%

              抗生素:雙抗

              培養(yǎng)條件:37℃,CO2: 5%

              傳代方法   收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài):

              如果沒長滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

              如果細胞已經(jīng)長滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

              貼壁細胞傳代方法:

              1 棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

              2 加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),隨時觀察細胞狀態(tài)變化,待細胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

              懸浮細胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

              1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

              2離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi), 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

               一般沒有特殊說明,細胞一般是一傳二。

              凍存方法   70% *培養(yǎng)基,20%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

              儲存:液氮中長期保存。

              注  1 觀察細胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計細胞密度。

              2 在運輸過程中可能會導(dǎo)致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

              3 收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等,請拍照并在一周內(nèi)與我們。

              我公司建議用我們實驗室所用血清品牌和貨號,細胞長勢好,貼壁度強,凡購買我公司MHCC-97L細胞,我們會贈送20-50ML試用裝一瓶。

              MHCC-97L MHCC-97L細胞 細胞株培養(yǎng)-慧穎細胞庫培養(yǎng)經(jīng)驗:1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺得這樣可以避免污染。如遇到有培養(yǎng)基越來越呈現(xiàn)紫色現(xiàn)象,是因為燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高)其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。2. 不要頻繁看細胞。對于初學(xué)者而言,養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細胞,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學(xué)者往往生怕細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大。在做血管平滑肌原代的時候,37度消化隔夜,細胞也沒事。我們一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時的機械應(yīng)力相當(dāng)大,對細胞的傷害也是很大的。

              KYSE30細胞*人食管鱗癌細胞

              RKO細胞*人結(jié)腸腺癌細胞

              HO-8910細胞*人卵巢癌細胞

              HS-578T細胞*人乳腺癌細胞

              BE(2)-M17細胞*人神經(jīng)母細胞瘤細胞

              HT-22細胞*小鼠海馬神經(jīng)元細胞

              MLE-12細胞*小鼠肺上皮細胞

              HK-2細胞*人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

              MRC-5細胞*人胚肺成纖維細胞

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