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              HCT-8/Taxol細(xì)胞

              發(fā)布時(shí)間:2016-04-28瀏覽:873次

              1.試劑和溶液

              1)轉(zhuǎn)印緩沖液:0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

              2)氨基黑溶液:0.1% 酸性黑10B

              3)1×TBST:25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

              4)封閉液:TBST配制的5%牛奶

              5)抗體稀釋液:TBST配制的5%牛奶

              6)顯色系統(tǒng):ECL顯色

              2.實(shí)驗(yàn)步驟

              1電泳:將裂解液進(jìn)行SDS-PAGE電泳,80v,30分鐘,120v,90分鐘;

              2轉(zhuǎn)膜:PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右,濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕,半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上,10v,150分鐘;

              3染色:氨基黑染色5分鐘,甲醇褪去背景色,觀察條帶;

              4膜活化:將PVDF膜置于甲醇活化1min,用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次;

              5封閉:將膜條置于5%牛奶或2% BSA中,室溫混搖2h;

              6一抗孵育:將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度(參照抗體說(shuō)明書(shū),根據(jù)客戶預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,稀釋度上下浮動(dòng)一個(gè)數(shù)量級(jí)都為正常),將膜放入對(duì)應(yīng)的已稀釋待檢樣品中,置4℃混搖孵育隔夜;

              7洗滌:取出膜放在TBST中洗滌3×5min;

              8二抗孵育:將膜取出放入稀釋好的HRP標(biāo)記的二抗(參照二抗說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋)中,室溫混搖2h;

              9洗滌:取出膜放在TBST中洗滌3×5min;

              10ECL顯色:將膜取出放入混勻的ECL顯色液中,孵育3min,將膜取出貼在有熒光角標(biāo)的膠片上,迅速用保鮮膜包好;

              11曝光:把底片放在暗盒中,根據(jù)熒光強(qiáng)度分別對(duì)X光膠片作不同時(shí)間段的曝光,曝光結(jié)束后,將底片取出,1min顯影,30s清洗,1min定影,30s清洗,晾干;

              12結(jié)果分析:用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描,做后續(xù)結(jié)果分析。

              購(gòu)買(mǎi)放心細(xì)胞株細(xì)胞系,耐藥濃度倍數(shù)高穩(wěn)定耐藥株,選擇慧穎生物

              慧穎生物提供腫瘤耐藥細(xì)胞株的建立與服務(wù)?;鄯f生物可以根據(jù)客戶要求構(gòu)建相應(yīng)的細(xì)胞系。腫瘤耐藥株的建立和應(yīng)用,能夠給予臨床zui直接的指導(dǎo)。

              服務(wù)內(nèi)容 價(jià)格 服務(wù)周期

              藥物濃度梯度遞增法建立耐藥細(xì)胞株 詢價(jià)6個(gè)月

              大劑量間歇誘導(dǎo)法建立耐藥細(xì)胞株 詢價(jià)6個(gè)月

              主要提供一下耐藥細(xì)胞株的建立:

              人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

              人乳腺癌紫杉醇耐藥株

              人肺腺癌紫杉醇耐藥株

              人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

              人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

              人口腔上皮癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

              人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株

              人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株

              人卵巢癌順鉑耐藥株

              人白血病阿霉素耐藥株

              人卵巢癌紫杉醇耐藥株

              人胃癌順鉑耐藥株

              人白血病阿霉素耐藥株

              人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

              人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

              人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

              人乳腺癌抗雌激素耐藥株

              人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

              小鼠激素依賴性乳腺癌細(xì)胞

              服務(wù)周期

              1. 有現(xiàn)成的細(xì)胞系:6個(gè)月,具體時(shí)間根據(jù)客戶的要求以及樣本數(shù)而定;

              2. 沒(méi)有已建成的細(xì)胞系,需要構(gòu)建,公司構(gòu)建時(shí)間約為15個(gè)月左右。

              公司熱賣耐藥株:K562/Adr細(xì)胞,BIU-87/Adr細(xì)胞,A549/DDP細(xì)胞,NCI-H446/VP細(xì)胞,A549/Taxol細(xì)胞,A549/DDP細(xì)胞,H1975/培美曲塞細(xì)胞,BEL-7402/FU細(xì)胞,HCT-8/VCR細(xì)胞,HCT-8/FU細(xì)胞,HCT-8/Taxol細(xì)胞,A2780/Taxol細(xì)胞,A2780/DDP細(xì)胞,MCF-7/Adr細(xì)胞,Eca-109/VCR細(xì)胞,SGC-7901/DDP細(xì)胞,PATU-8988/FU細(xì)胞,PATU-8988/FU細(xì)胞,HCT116/L-OHP細(xì)胞,LOVO/ADR細(xì)胞,SGC7901/DDP細(xì)胞,SGC7901/VCR細(xì)胞,L1210/DDP細(xì)胞,H446/VP細(xì)胞,COC1/DDP細(xì)胞,HepG2/ADR細(xì)胞等。

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