CAL-27細(xì)胞

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進(jìn)口胎牛血清|Gibco血清|BOVOGEN血清|SERANA血清

常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法

初代培養(yǎng)

原理

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。    

儀器、材料及試劑

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱（37℃）

材料：動(dòng)物組織塊

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

初代消化培養(yǎng)法

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

我們實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞傳代的一般方法

這一方法較簡(jiǎn)單，不需要離心，而且消化后細(xì)胞很少聚集成團(tuán)，具體步驟如下：

1、吸盡待傳代細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液，按1：1 的比例加入適量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培養(yǎng)瓶各加2滴管消化（消化時(shí)不要晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，以免消化不*而導(dǎo)致細(xì)胞成片脫落，從而導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)，無(wú)法吹散）。

2、消化致細(xì)胞變圓，細(xì)胞相互脫離接觸但還未從瓶壁脫落時(shí)，吸盡胰酶和EDTA。

3、利用殘留的胰酶和EDTA繼續(xù)消化數(shù)分鐘。

4、加入適量培養(yǎng)液，反復(fù)吹打，然后分別接種致新的培養(yǎng)瓶。

注：消化的時(shí)間需根據(jù)不同細(xì)胞摸索確定。

ACC-2人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

ACC-3人腺樣囊性癌

ACHN人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

AE-1雜交瘤細(xì)胞抗AChE

AE-2雜交瘤細(xì)胞抗AChE

AGS人胃腺癌細(xì)胞

AN3CA人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

ANA-1小鼠巨噬細(xì)胞

ARO甲狀腺癌細(xì)胞（未分化）

AsPC-1人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞

ATT-20小鼠垂體瘤

B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞

B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞

B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

Bcap-37人乳腺癌

BEL-7402人肝癌

BEL-7404人肝癌

BEL-7405人肝癌

Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞

BGC-823低分化胃腺癌

BHK-21 [C-13]倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞

BIU-87人膀胱癌細(xì)胞

BMSC人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

BNL CL.2小鼠胚胎肝細(xì)胞

BRL大鼠肝細(xì)胞

BRL 3A大鼠肝細(xì)胞

BT-20人乳癌

BT-325人腦多形性膠質(zhì)瘤細(xì)胞

BT474人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

BT-549人乳腺管癌細(xì)胞

BxPC-3人原位胰腺腺癌細(xì)胞

C127小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞

C200人卵巢癌

C26小鼠結(jié)腸癌

C2C12小鼠成肌細(xì)胞

C-33 A人子宮頸癌

C3H小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

C6大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

Ca Ski人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞

Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

CaKi-1人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

CaKi-2人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

CAL-27人舌鱗癌細(xì)胞

Calu-1人肺癌細(xì)胞

Calu-3人肺腺癌 (胸水)

Calu-6人退行性癌細(xì)胞

CaOV3人卵巢癌細(xì)胞

Capan1人胰腺癌細(xì)胞

Capan2人胰腺癌細(xì)胞

CaSki人宮頸腸轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞

CBRH-7919大鼠肝癌細(xì)胞

CCD-1095Sk人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞

CCRF-CEM人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞

CEM/C1人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞

Chang liver人張氏肝細(xì)胞

CHL倉(cāng)鼠肺細(xì)胞

CHO中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞

CHO/dhFr倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷

CHO-K1倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株

CL1人前列腺癌

CCRF-CEM人鼻咽癌細(xì)胞

CNE-2人鼻咽癌細(xì)胞

COLO 205人結(jié)腸癌細(xì)胞

COLO 320DM人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

COLO-704人卵巢癌細(xì)胞

COLO720E人卵巢癌細(xì)胞

COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞

COS-7非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞

COV362人卵巢癌細(xì)胞

COV434人卵巢癌細(xì)胞

COV504人卵巢癌細(xì)胞

COV644人卵巢癌細(xì)胞

CRFK貓腎細(xì)胞