大鼠糖化血紅蛋白（HbA1c） ELISA試劑盒

            大鼠糖化血紅蛋白（HbA1c） ELISA試劑盒使用說明書

實驗原理：

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 HbA1c 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 HbA1c 與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠 HbA1c ，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的 Streptavidin 與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液硫酸，在 450nm 處測 OD 值， HbA1c 濃度與 OD 值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中 HbA1c濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.收集標(biāo)本：血清、血漿（ EDTA ）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存 48 小時；更長時間須冷凍（ -20 ℃ 或 -70 ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。 血清測定前用標(biāo)本稀釋液作 1 ： 20 倍 稀釋。

2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入 1ml 蒸餾水 混勻，配成 2000% 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管 8 管，*管加標(biāo)本稀釋液 900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在*管中加入 2000% 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出 500ul 棄去。第八管為空白對照。

3.10 ×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1:10 倍稀釋（ 示例： 1ml 濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例： 1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入*抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 60 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 30 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液 100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng) 15 分鐘。

8.  每孔加入 100ul 終止液混勻。

9.  30 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0nm 處測 吸光值。

結(jié)果計算與判斷

1. 所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品 200 、 100 、 50 、 25 、 12.5 、 6.25 、 3.12 、 0 % 為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng) HbA1c 含量 即可 。

試劑盒性能

 1.   靈敏度 ： zui小的 HbA1c 檢測濃度小于 1.5% 。

2. 特異性： 可同時檢測重組或天然的大鼠 HbA1c 。 不與 大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10 ％。

注意事項

 1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  2.   洗滌過程 很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及 OD 值錯誤地升高。

  3.   板條開封后剩余板條要再封好，保持 板條干燥 。

  4.   本試劑盒宜置 4^o C 冰箱保存。

  5.   本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！